動物性食品中五氯酚鈉殘留量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法
（電子版本僅供參考，以標準正式出版物為準）
1.本標準規(guī)定了動物性食品中五氯酚鈉殘留量檢測的制樣和氣相色譜質(zhì)譜法。
本標準適用于豬的肌肉、肝臟和腎臟及雞的肌肉和肝臟組織中五氯酚鈉殘留量的檢測。
2.規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本適用于本標準。
*GB/T 1.1-2000 標準化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標準的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則
GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3.原理
試料中殘留的五氯酚鈉，用三***沉淀蛋白，環(huán)己烷 -乙酸乙酯溶液提取，乙酸酐-吡啶溶液衍生，氣相色譜-質(zhì)譜法測定，外標法定量。
4.試劑和材料
以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純試劑；水為符合 GB/T 6682 規(guī)定的**水。
4.1 五氯酚鈉標準品：含量≥98.0%。
4.2 碳酸鉀
4.3 正己烷
4.4 環(huán)己烷
4.5 乙酸乙酯
4.6 乙酸酐
4.7 吡啶
4.8 三***
4.9 濃鹽酸
4.10 5％三***溶液：取***溶液 5 g，用水溶解并稀釋至 100 mL。
4.11 2.4 mol/L 鹽酸溶液：取濃鹽酸 20 mL，用水溶解并稀釋至 100 mL。
4.12 環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液：取乙酸乙酯 10 mL，加環(huán)己烷 40 mL，混勻。
4.13 乙酸酐-吡啶溶液：取乙酸酐 10 mL，加吡啶 10 mL，混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。
4.14 0.2 mol/L 碳酸鉀溶液：取碳酸鉀 27.6 g，用水溶解并稀釋至 1 000 mL。
4.15 1 mg/mL 五氯酚鈉標準貯備液：精密稱取五氯酚鈉標準品 10 mg，于 10 mL 量瓶中，用水溶解
并稀釋至刻度，配制成濃度為 1 mg/mL 的五氯酚鈉標準貯備液。-20℃以下保存，有效期為 3 個月。
4.16 2 μg/mL 五氯酚鈉標準工作液：精密量取 1 mg/mL 五氯酚鈉標準貯備液 200 μL，于 100 mL 量瓶
中，用水稀釋至刻度，配制成濃度為 2 μg/mL 的五氯酚鈉標準工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
5.儀器和設(shè)備
5.1 氣相色譜質(zhì)譜儀：配 EI 源。
5.2 分析天平：感量 0.000 01 g。
5.3 天平：感量 0.01 g。
5.4 高速離心機
5.5 振蕩器
5.6 旋渦混合器
5.7 組織勻漿機
5.8 氮吹儀
5.9 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀
5.10 離心管：50 mL。
6.試料的制備與保存
6.1 試料的制備
取適量新鮮或解凍的空白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)。
——取均質(zhì)的供試樣品，作為供試試料。
——取均質(zhì)的空白樣品，作為空白試料。
——取均質(zhì)的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試料。
6.2 試料的保存-20℃以下貯存?zhèn)溆谩?/span>
7.測定步驟
7.1 基質(zhì)匹配標準曲線的制備
準確量取 2μg/mL 五氯酚鈉標準工作液適量，用水配制成濃度為 2、5、10、20、50、100 ?g/L 的系列標準溶液，各取 1.0 mL，分別溶解經(jīng)提取、蒸吹干后的 6 份空白試料殘余物，混勻，用 2.4 mol/L鹽酸溶液調(diào) pH 至小于 2.0，加環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液 5 mL，旋渦混合，8 000 r/min 離心 10min，移取有機層，再加環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液 5 mL，旋渦混合，8 000 r/min 離心 10 min，合并兩次有機層，于45℃旋轉(zhuǎn)蒸干。按衍生化步驟操作，供氣相色譜質(zhì)譜測定。以特征離子質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標，對照溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù) 。
7.2 提取
稱取試料（ 5?.05）g，于 50 mL 離心管中，加水 10 ml，旋渦混勻，8 000 r/min 離心 10min，取上清液，加 5%三*** 5 ml，旋渦混勻，8 000 r/min 離心 10 min，取上清液，用 2.4 mol/L 鹽酸溶液調(diào) pH 至小于 2.0，加環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液 5 mL，旋渦混合，8 000 r/min 離心 10 min，移取有機層，再加環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液 5 mL，旋渦混合，8 000 r/min 離心 10 min，合并兩次有機層，于 45℃旋轉(zhuǎn)蒸干。
7.3 衍生化
殘余物中加環(huán)己烷-乙酸乙酯 1.0 mL，加無水硫酸鈉少量，加乙酸酐-吡啶溶液 100 μL，密封，于60℃反應(yīng) 15 min，冷卻，加碳酸鉀溶液 0.5 mL，充分混勻，靜置分層，取有機相，供氣相色譜質(zhì)譜測定。
7.4 測定
7.4.1 色譜條件
色譜柱：DB-5MS 5%苯基甲基聚硅氧烷（30 m*25 mm，膜厚 0.25 um），或相當(dāng)者；
進樣口溫度：250℃；
進樣方式：不分流進樣；
進樣體積：2 ?L；
柱溫：初溫 140℃，保留 2 min，以 10℃/min 升溫至 200℃，以 15℃/min 升溫至 280℃，保持 3.0 min。
載氣：氦氣，1.0 mL/min（恒流）
7.4.2 質(zhì)譜條件：
EI 源：70 ev；
溶劑延遲：3 min；
GC/MS 傳輸線溫度：280℃；
選擇離子檢測方式，檢測離子 Sim(M/Z)：266，308，237，165，130；
定量離子：266。
7.4.3 測定法
通過試樣色譜圖的保留時間與標準溶液的保留時間、色譜峰的特征離子與相應(yīng)濃度標準品各色譜峰的特征離子相對照定性。試樣溶液中的離子相對豐度與基質(zhì)匹配標準溶液中的離子相對豐度相比，符合表1的要求。基質(zhì)匹配標準溶液和添加試液中特征離子的質(zhì)量色譜圖分別見附錄A。
表 1 試料溶液中離子相對豐度的允許偏差范圍
相對豐度%
|
允許偏差%
|
＞50
|
±20
|
＞20 ～50
|
±25
|
＞10 ～20
|
±30
|
≤10
|
±50
|
7.5空白試驗
取空白試料采用完全相同的測定步驟進行平行操作。
8 結(jié)果計算與表述
式中：
X——供試試料中五氯酚鈉的殘留量，ug/kg；
Cs——標準溶液中五氯酚鈉濃度，ng/mL；
C——供試試料溶液中五氯酚鈉濃度，ng/mL；
As——標準溶液中五氯酚鈉的衍生物的峰面積；
A——供試試料溶液中五氯酚鈉的衍生物的峰面積；
V——殘余物定容體積，mL；
m ——供試試料質(zhì)量，g。
注：計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。
9.檢測方法靈敏度、準確度、精密度
9.1 靈敏度
本方法的檢測限為 0.25 ug/kg。
本方法的定量限，肌肉組織中為 0.5 μg/kg，肝臟和腎臟組織中為 1 μg/kg。
9.2 準確度
本方法在肌肉組織 0.5～2 μg/kg、在肝臟和腎臟組織 1～4 μg/kg 添加濃度水平上的回收率范圍為
60%～120%。
9.3 精密度
本方法批內(nèi)相對標準偏差≤20%，批間相對標準偏差≤20%。
附 錄 A
（資料性附錄）
圖 A1 五氯酚鈉標準溶液特征離子質(zhì)量色譜圖（2ug/L）
圖 A2 豬肝臟組織空白試樣特征離子質(zhì)量色譜圖
圖 A3 豬肝臟組織空白添加五氯酚鈉試樣特征離子質(zhì)量色譜圖（1 μg/kg）
